MOPS ist eine organische Verbindung mit der Summenformel C ₇ H ₁₅ NO ₄ S und einem Molekulargewicht von 209,26. MOPS ist ein wichtiger biologischer Puffer, der häufig zur Herstellung von RNA-Elektrophoresepuffer verwendet wird. Es kann nicht nur als Puffersystem für Zellkulturmedien verwendet werden, sondern auch als üblicher Elektrophoresepuffer und Proteinreinigungs-Chromatographiepuffer. Das Patent CN114317704B stellt ein Verfahren und einen Kit zum Nachweis von N6-Methadenin in Nukleinsäuremolekülen vor. Das MOPS im Patent wird hauptsächlich als Pufferkomponente verwendet, diese Woche stellte der YACOO-Redakteur ein Verfahren zum Nachweis von N6-Methyladenin in Nukleinsäuremolekülen vor. Die konkreten Schritte sind wie folgt:

(1) die Aminogruppe von Guanin in dem zu testenden Nukleinsäuremolekül wird geschützt, um das geschützte Nukleinsäuremolekül zu erhalten;

(2) In Gegenwart von Carbonylverbindungen reagieren die geschützten Nukleinsäuremoleküle mit Nitrit in einem Lösungsmittel, um Adenin in den Nukleinsäuremolekülen in Hypoxanthin umzuwandeln. Das Lösungsmittel ist Wasser, MES-Puffer, Natriumacetat-Puffer, MOPS-Puffer, PIPES-Puffer, HEPPS-Puffer, TRIS-Puffer oder eine beliebige Kombination davon ;

(3) gegebenenfalls Entschützen des in Schritt (2) erhaltenen Produkts;

(4) Nachweis der im vorherigen Schritt erhaltenen Produkte.

Das erfindungsgemäße Verfahren verwendet Nitrit, um Adenin in dem zu testenden Nukleinsäuremolekül zu desaminieren und in Hypoxanthin umzuwandeln, während N6-Methyladenin aufgrund seiner stabilen chemischen Eigenschaften nicht desaminieren kann, so dass der Nachweis des m6A-Modifikationsgrads oder der m6A-Stelle erfolgen kann realisiert durch Analyse des Signals von Adenin oder Hypoxanthin vor und nach der Transformation. Diese Methode weist eine hohe Empfindlichkeit und genaue Quantifizierung auf und kann N6-Methyladenin im gesamten Genom oder im gesamten Transkriptom auf Einzelbasenebene nachweisen.

Referenz

CN114317704B Verfahren und Kit zum Nachweis von N6-Methadenin in Nukleinsäuremolekülen.