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Die Prinzip und Vorsichtsmaßnahmen von Thiazol blau (MTT) Kolorimetrie 2020-10-28 14:39:59

1Was ist Thiazol blau ( MTT )

Thiazol Blau, cas Nummer 298-93-1, Summenformel c 18 h 16 BrN 5S, ist gelb oder orange-gelb Pulver, Schmelzpunkt: 195 ° C (Zersetzung) in Methanol schwer löslich, in Wasser oder Ethanol jedoch kaum löslich es kann nicht vollständig aufgelöst sein mit Ether, Aceton oder Ethylacetat gelöst in DMSO. es wird oft als 5 mg / ml formuliert Lager Lösung.

 

2 Nachweisprinzip von Thiazol blau (MTT) kolorimetrische Methode

Thiazol blau (MTT) Die Kolorimetrie ist eine Methode zum Nachweis des Überlebens und des Wachstums von Zellen Die Prinzip der MTT Experiment ist, dass das Succinat Dehydrogenase in den Mitochondrien lebender Zellen kann die exogene MTT reduzieren zu wasserunlöslichem blau-lila Kristall formazan (Formazan) und lagere es in den Zellen ab, während tote Zellen keine solche Funktion haben. Dimethyl Sulfoxid (DMSO) kann formazan auflösen in Zellen, und sein Lichtabsorptionswert wird bei 490 nm gemessen Wellenlänge mit ein enzymgebundenes Immunoassay, der kann indirekt die Anzahl der lebenden Zellen widerspiegeln. Die Menge von MTT Die Kristallbildung in einem bestimmten Zellzahlbereich ist proportional zur Zellzahl nach dem gemessenen Absorptionswert (OD -Wert) wird die Anzahl der lebenden Zellen beurteilt. Die Je größer der OD-Wert ist, desto stärker ist die Zellaktivität (wenn die Arzneimitteltoxizität gemessen wird, desto geringer ist die Arzneimitteltoxizität) This Die Methode wurde in großem Umfang beim Aktivitätsnachweis einiger biologisch aktiver Faktoren, des großflächigen Antitumors, eingesetzt Wirkstoff-Screening, Zytotoxizitätstest und Bestimmung der Tumor-Strahlenempfindlichkeit es zeichnet sich durch hohe Empfindlichkeit und Wirtschaftlichkeit aus

3Anwendung von Thiazol blau (MTT)

MTT wird normalerweise zur Zellproliferation, Bestimmung der Lebensfähigkeit der Zellen und zum Arzneimittel (einschließlich anderer Behandlungen wie Strahlenexposition) verwendet um die Toxizität von kultivierten Zellen in vitro zu bestimmen

4. Die Vor- und Nachteile von Thiazol blau (MTT) Kolorimetrie

(1) Vorteile: es ist einfach, schnell, wirtschaftlich und verwendet keine Isotope.

(2) Nachteile: Die formazan Produkt hergestellt durch die Reduktion von MTT ist wasserunlöslich und muss vor dem Nachweis aufgelöst werden Eine Erhöhung der Arbeitsbelastung wirkt sich auch auf die Genauigkeit der experimentellen Ergebnisse und das organische Lösungsmittel aus, das formazan löst ist auch gesundheitsschädlich für die Experimentatoren.

5. Vorsichtsmaßnahmen für Thiazol blau (MTT)

(1) Bei der Vorbereitung und Lagerung wird der Behälter am besten mit umwickelt Aluminiumfolie

(2) Die vorbereitet MTT muss steril sein und MTT ist sehr empfindlich gegenüber Bakterien

(3) MTT ist in der Regel am besten sofort vorzubereiten es ist innerhalb von zwei Wochen nach Filtration bei 4 wirksam ° c und geschützt vor Licht, oder es ist formuliert als 5 mg / ml und gespeichert bei -20 ° c zur Langzeitlagerung. wiederholtes Einfrieren und Auftauen vermeiden Es ist am besten, in kleinen Dosen zu verpacken wickeln Sie es in eine lichtdichte Beutel oder schwarzes Papier oder Alufolie, um leichte Zersetzung zu vermeiden Wann MTT wird grau-grün, kann nie wieder verwendet werden

(4) MTT ist krebserregend, verwenden Sie es vorsichtig und wenn möglich, es ist am besten, transparente Filmhandschuhe zu tragen Im Allgemeinen ist die MTT Konzentration in this Methode ist 5 mg / ml. Deshalb du kann MTT wiegen 0,5 g, löse es in 100ml Phosphatpuffer (PBS) oder Phenol rot-frei Medium, filtern Sie es mit a 0,22 μ m mikroporös Membran, um Bakterien in der Lösung zu entfernen, lagern Sie es bei 4 und vermeiden Sie Licht can. Bei der Vorbereitung und Lagerung wird der Behälter am besten mit umwickelt Aluminiumfolie

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