in den Experimenten der Molekularbiologie, Induktor iptg zur Proteinexpression ist nicht neu für alle. es ist ein Molekülmimetikum der Allolactose, das die Transkription des lac-Operons auslöst und eine Proteinexpression induziert, bei der das Gen unter der Kontrolle des lac-Operons steht.
aber in der Verwendung von IPTG ( Isopropyl-β-d-1-thiogalactopyranosid ), ist höhere Konzentration immer besser?
Lassen Sie uns zuerst das induktive Prinzip von iptg überprüfen.
die überwiegende Mehrheit der Gene der Prokaryoten ist in einem Cluster nach funktionalen Zusammenhängen angeordnet und konzentriert sich auf die Chromosomen zu einer Transkriptionseinheit - dem Operon. Lactose-Operon von e. coli enthält drei Strukturgene z, y und a, die für β-Galactosidase, Permease bzw. Transacetylase kodieren. zusätzlich gibt es das regulatorische Gen: Manipulationssequenz (Operator), Startsequenz p (Promotor); während i (kodierender lac-Repressor) nicht zum Lactose-Operon gehört.
In diesem Operonsystem ist der eigentliche Induktor keine Laktose. Lactose tritt in Zellen ein und wird durch β-Galactosidase zu Allolactose-physiologischem Induktor katalysiert. im Experiment, iptg ( Isopropylglucosinolate Galactose Glucosid ) sind weit verbreitet, da es ein starker Induktor ist, der nicht vom bakteriellen Metabolismus beeinflusst wird und sehr stabil ist.
dann kommen wir zurück auf die obige Frage: die Konzentration von iptg, ist es umso höher, je besser?
die Antwort ist nicht wirklich!
(2) im Allgemeinen hoffen wir, dass lösliches Protein so viel mehr wie möglich exprimieren kann, während eine hohe Einschlussmenge gebildet wird, wenn die iptg-Konzentration zu hoch ist, dann wird die Menge an löslichem Protein reduziert.
Daher ist die geeignetste Konzentration von iptg oft nicht hoch.
das Expressionsniveau des Zielgens wird durch Faktoren wie Induktorkonzentration, Induktionstemperatur, Induktionszeit usw. beeinflusst. Daher ist es bei der Expression und Reinigung eines unbekannten Proteins am besten, die relevanten Faktoren zu untersuchen, einschließlich der Konzentration von Induktor iptg ( cas 367-93-1 ), um die geeigneten Bedingungen auszuwählen, um die besten experimentellen Ergebnisse zu erhalten.
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