Das CELI-Enzym ist eine spezifische Nuklease, die sowohl einzelsträngige als auch doppelsträngige spezifisch erkennt. Derzeit wird CELI-Enzym hauptsächlich aus Sellerie extrahiert. Dieses Enzym kann fehlgepaarte Basen spezifisch spalten und wird häufig auf dem Gebiet der Mutationsdetektion verwendet. Traditionelle Theorien glauben, dass die katalytische Aktivität des Enzyms nur Mg ²⁺ und Zn ²⁺ erfordert . Dithiothreitol, englischer Name DL-Dithiothreitol, abgekürzt als DDT , Summenformel C ₄ H ₁₀ O ₂ S ₂ , Molekulargewicht 154,25, oft als Reduktionsmittel verwendet, hat antioxidative Wirkung. Heute werde ich die Anwendung von DTT bei der Herstellung von Enzymverdauungspuffern der CELI-Familie vorstellen.

Der Enzymverdauungspuffer der CELI-Familie besteht aus DTT, BSA (Rinderserumalbumin), 0,02 % Triton X-100, 0,1 M KCl und HEPES-Puffer, darunter:

Der Enzymverdauungspuffer der CELI-Familie, der DTT enthält, besteht aus dem Puffer des Mutation Detection Kit-S100-Kits und DTT. Mutation Detection Kit-S100 Kit-Puffer ist ein Produkt der Universal Gene Corporation, die Katalognummer ist 706025;

Die Konzentration von DTT im Enzymverdauungspuffer der CELI-Familie beträgt 0,01–0,5 mM, 0,5–10 mM oder 0,01–6 mM;

Die BSA-Konzentration beträgt 2 ug/ml;

Die Konzentration des HEPES-Puffers beträgt 0,1 M und der pH-Wert beträgt 7,5.

Die neue katalytisch aktive Substanz DTT kann die Aktivität von CELI weiter verbessern, insbesondere für den Nachweis von Mutationen mit geringer Häufigkeit. Verglichen mit dem traditionellen Enzymverdauverfahren ist das Verfahren der vorliegenden Erfindung empfindlicher und die Endkonzentration von DTT liegt im Bereich von 0,01–10 mM. Beide können die Nachweisempfindlichkeit des CELI-Enzyms und des CELII-Enzyms verbessern. Der Nachweis von unbekannten Mutanten in geringer Häufigkeit, beispielsweise eines bestimmten Krebsgens, hat einen guten Nachweiseffekt. Besonders wenn die TILLING-Technologieplattform mutagene Populationen erkennt, hat sie offensichtliche Vorteile. Es vereinfacht nicht nur die PCR-Reinigungsschritte, sondern verbessert auch die Detektionsauflösung.

Verweise