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Vorbereitung von Tricin-SDS-Seitengel

2018-04-12 13:01:51

Tricinist ein zwitterionischer Puffer für die Biochemie und Molekularbiologie, mit einem phPufferbereich von 7,4-8,8. Während der SDS-Seite, um kleine Peptide zu trennen, ist Tricinüblicherweise anstelle von Glycin im Laemmli-Puffer verwendet. Tricin-SDS-Seitengelhat überlegene Leistung für die Identifizierung von Proteinen mit molekularenGewicht unter 10 kd. während herkömmliche sds-Seite verwendet wird, um diese zu trennenProteine, einige Probleme können auftreten, wie vage Streifen, zu weiches Gel. Hierwir beschreiben eine Präparationsmethode für Tricin-SDS-Seitengel.


Reagenzien:

AnodePuffer (+): 200 mm Tris ph = 8,9

kathodischPuffer (-): 100 mm Tris / 100 mm Tricin / 0,1% SDS

GelPuffer: 3,0 m Tris, pH = 8,45 / 0,3% SDS

StapelnAcrylamid: 48% Acrylamid / 1,5% Bisacrylamid

TrennungAcrylamid: 46,5% Acrylamid / 1,5% Bisacrylamid

ProbePuffer (20 ml):

5ml 0,5 m Tris ph = 6,8; 4 ml 20% SDS; 1 ml 2-Mercaptoethanol; 4 ml 50% Glycerin;0,004 g Bromphenolblau; 6 ml ddh 2 O.

Trenngel:

15%Gel: 2 ml trennendes Acrylamid, 2 ml Gelpuffer, 2 ml 50% Glycerin.

10%Gel: 1,22 ml Acrylamidspezies, 2 ml Gelpuffer, 2 ml 50% Glycerin und 0,78ml ddh 2 O.

dasDie Polymerisation wurde mit 75 μl 10% igem Ammoniumpersulfat (aps) durchgeführt7,5 ul Tetraethylethylendiamin (bezogen).

Stapelgel:

0,25ml Stapelacrylamid, 0,75 ml Gelpuffer, 2 ml ddh 2 o, 20 ul 10%aps, 2 ul.

dasStapeln und das Trenngel sollten gleichzeitig polymerisiert werden, unddann gießen Sie das Stapelgel auf den Trennkleber (vorsichtig aber schnell gießen).

Beispiel laden undElektrophorese:

zumdas Minigel, 5-10 ul pro Vertiefung, liefert die besten Ergebnisse. schichten Sie die Proben sehr sorgfältig in den Brunnen ein,und achten Sie darauf, unpolymerisiertes Acrylamid vor dem Beladen auszuspülen. nachBeim Laden der Probe wurde im Minigel-Setup ein konstanter Strom von 25-35 ma eingestelltfür die elektrophoretische Analyse. Während des Laufs erscheint Schaum auf der Oberseitedie Kathode und der zusätzliche Kathodenpuffer müssen hinzugefügt werden.


dasobige Beschreibung der Herstellung von Tricin-SDS-Gel bietet eineBeispiel für Forscher. aber in einem spezifischen Experiment ist es auch notwendig,finden eine geeignete Präparationsmethode, die für das Experiment gemäß derdie aktuelle Situation.


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