bcip / nbt ist einsder Substratkombinationen für alkalische Phosphatase (ap) und wird verwendet umNachweis von Antigen, das an Nitrocellulose oder andere Membranen gebunden ist. unter der Katalysevon p, wird bcip hydrolysiert, um ein starkes reaktives Produkt zu erzeugen, das mit reagiertNBT zu einem unlöslichen dunkelblau bis bläulich-lila Produkt. die entsprechendeKit kann für die enzymatische chromogene Reaktion der alkalischen Phosphatase verwendet werdensystem in ihc und wb experimente. unter der Katalyse von ap, ein tiefes BlauNiederschlag wird an der Stelle erzeugt, an der das ap - Konjugat gebunden istGewebeschnitt oder die Blot - Membran, und die Position und Expression derZielprotein kann gemäß der Farbreaktion bestimmt werden. folgendeBeschreibt kurz die Herstellungsmethode der bcip / nbt-Färbelösung:

Herstellung von bcip, NBT-Lösung und Puffer

(1) 1l trisPuffer (0,1 m Tris, 0,5 mm Magnesiumchlorid, pH = 9,5)

12.1g Tris und 0,12 g Magnesiumchloridhexahydrat wurden zu 800 mldestilliertes und deionisiertes Wasser (dd H2O). dann wurde der ph auf 9,5 mit eingestelltSalzsäure und schließlich wurde dd H2O zugegeben, um 1 l Tris-Puffer zu erhalten.

(2) NBT-Lösung

0.7ml dmf und 0,3 ml dd H2O wurden gemischt, um 1 ml einer Lösung zu ergeben, die enthielt70% dmf und dann 30 mg nbt wurden darin gelöst.

(3) bcipLösung

hinzufügen15 mg bcip zu 1 ml DMF, um eine bcip-Lösung zu erhalten.

Vorbereitung der bcip / nbt Farblösung

dasoben hergestellte NBT-Lösung und die bcip-Lösung wurden gemischt und zu 100 hinzugefügtml Tris-Puffer, um eine entsprechende Farbentwicklungslösung zu erhalten.

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