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Guanidinhydrochlorid oder Harnstoff - welches ist ein besseres Proteindenaturierungsmittel?

2018-03-28 16:47:01

im allgemeinen können Guanidinhydrochlorid und Harnstoff seinals Proteindenaturierungsmittel verwendet. Guanidinhydrochlorid und Harnstoff werden im allgemeinen verwendetum eine Schätzung der Proteinkonformationstabilität zu erhalten (der Unterschiedzwischen Proteinen in ihren nativen und denaturierten Zuständen). ist das Ergebnis erhaltendiese beiden Vergällungsmittel konsistent verwenden? Werfen wir einen Blick auf die Ergebnisse vonMonera et al. [1] .


obwohl Harnstoff und Guanidinhydrochlorid häufig sindals Denaturierungsmittel für Proteine ​​verwendet, unterscheiden sie sich in ihrer grundlegenden molekularenStruktur. Harnstoff ist ein neutrales Molekül, und Guanidinhydrochlorid ist ionischNatur. basierend auf den oben genannten Fakten, in den frühen Phasen der Durchführung spezifischerExperimente, spekulierten sie, dass die Verwendung von Guanidinhydrochlorid und Harnstoffals Denaturierungsmittel zur Abschätzung der Proteinstabilität kann durch die Stabilisierung beeinflusst werdenWirkung von elektrostatischen Wechselwirkungen auf Proteine. zu diesem Zweck, siespeziell entworfen vier Coiled-Coil-Analoga, die allmählich die Intraketten verändertund elektrostatische Anziehungen zwischen den Ketten an Abstoßungen. dann waren die Datennachgewiesen unter Verwendung von Guanidinhydrochlorid und Harnstoff als Denaturierungsmittel. dasDie experimentellen Ergebnisse zeigten, dass für die vier Analoga der Wert von[Hydroguanidinhydrochlorid] 1/2 war sehr nah (3,5 m), und dieDer Unterschied der Stabilitätsenergie für die vier Analoga lag nahe bei 0 (0,2kcal / mol); der Wert von [Harnstoff] 1/2 nimmt allmählich proportional mit demstufenweiser Wechsel von elektrostatischen Anziehungen zu Abstoßungen undUnterschied im Energiewert, der die Stabilität des Proteins kennzeichnetAnalog ist auch größer als Null. Diese Ergebnisse zeigen, dass die ionische Natur vonGuanidinhydrochlorid kann in diesem Modell elektrostatische Wechselwirkungen maskierenProteine, während der neutrale Harnstoff keine abschirmende Wirkung hat.


aus den obigen Experimenten von Monera et al., währendUm die konformative Stabilität eines Proteins abzuschätzen, müssen wir dies zunächst bestätigendass der Effekt der elektrostatischen Wechselwirkung auf die Konformationsstabilität vonein Protein untersucht. wenn die elektrostatische Wechselwirkung dazu beiträgtmehr auf die konformative Stabilität des Proteins, die experimentellen Ergebnisseunter Verwendung von Guanidinhydrochlorid als Denaturierungsmittel erhalten, wird einen großen Fehler aufweisen.Deshalb müssen wir im Proteindenaturierungsexperiment umfassend vorgehenunter Berücksichtigung der Versuchspersonen und des Denaturierungsmittels selbst.


Referenz:

[1] o.d. Monera, c. m. kay, r. s. Hodges, Protein-Wissenschaft , 1994, 3, 1984-1991.

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