Bei allen Arten von Zell-, Protein- und DNA-Experimenten sind die Komponenten, sobald sie die natürliche biologische Umgebung verlassen, ernsthaft betroffen. Um ihnen eine gute natürliche Umwelt zu bieten, müssen Puffer, Tris, Phosphat, Hepes ( 4-Hydroxyethylpiperazinethansulfonsäure ), etc ...... dann, wie man einen am besten geeigneten Puffer wählt?

Werfen wir einen Blick auf die häufig verwendeten biologischen Puffer und ihre Eigenschaften:

1. Phosphatpuffer

Phosphatpuffer ist der am häufigsten verwendete Puffer. Aufgrund seiner sekundären Dissoziation hat der Puffer einen weiten pH-Bereich und kann mit sauren, basischen und neutralen Puffern mit verschiedenen pH-Werten konfiguriert werden:

• Herstellung von saurem Puffer kann direkt nah verwendet werden ₂ po ₄ oder kh ₂ po ₄ der pH-Bereich beträgt 1 ~ 5;
• alkalischer puffer kann na direkt verwenden ₂ hpo ₄ oder k ₂ hpo ₄ pH-Bereich ist 9 ~ 12;
• neutraler puffer enthält gleiche konzentrationen von nah ₂ po ₄ und na ₂ hpo ₄ oder gleiche Konzentrationen von kh ₂ po ₄ und k ₂ hpo ₄ lösungen bei ph 5,5 ~ 8,5.

2. Tris-Puffer

Tris-Puffer ist in der biochemischen Forschung weit verbreitet. es ist eine schwache Base und wird normalerweise im "neutralen" Bereich verwendet. Tris-HCl-Puffer: ph = 7,5 ~ 8,5; Tris-Phosphat-Puffer: pH = 5,0 bis 9,0.

Zusätzlich zu Tris-HCL verfügt Tris über eine Reihe von Derivatisierungspuffern:

• tbs = tris-hcl + nacl + kcl, üblicherweise zur Reinigung von immungefärbten Geweben oder Western-Blot-Membranen beim Western-Blot verwendet;
• tbst = tris-hcl + nacl + tween20, ein üblicherweise beim Western-Blotting verwendeter Membranpuffer;
• te = tris-hcl + edta, das gegen DNA-Basen schützt und häufig zur Stabilisierung und Lagerung von DNA verwendet wird;
• tae = Tris-Base + Essigsäure + Edta, ein Puffersystem, das in der Kurzsegment-DNA-Elektrophorese weit verbreitet ist;
• tbe = Trisbase + Borsäure + Edta, geeignet für die Langzeit-DNA-Elektrophorese und hat eine bessere Trennwirkung auf kleinere Fragmente.

3. Glycinpuffer

glycinpuffer hat einen weiten ph-bereich und ein breites anwendungsspektrum. der ph-bereich liegt zwischen 2,0 und 11,0. Das gebräuchlichste System und der pH-Bereich sind in der folgenden Tabelle aufgeführt:

4. Hepes-Puffer

Hepes ist ein nichtionischer amphoterer Puffer mit einer guten Pufferkapazität im Bereich von pH 7,2 bis 7,4. es wird üblicherweise in biochemischen diagnostischen Kits, DNA / RNA-Extraktionskits und PCR-diagnostischen Kits verwendet.

Tabelle 1. Vor- und Nachteile häufig verwendeter Puffer

Allgemeine Grundsätze für die Auswahl von Puffern:

(1) Das Wichtigste ist, den für Ihr System erforderlichen pH-Wert zu bestimmen.

(2) Wählen Sie das Puffersystem. Die Pufferkapazität nimmt erheblich ab, wenn sich der pka um mehr als eine pH-Einheit ändert.

(3) das Puffersystem sollte die Aktivität des Proteins oder die Stabilität der DNA nicht beeinträchtigen und Störungen durch andere Ionen vermeiden;

(4) Schließlich müssen wir auch den Einfluss der Temperatur berücksichtigen: Die Temperatur beeinflusst nicht nur den Puffer, sondern auch die Zellen. Die meisten tierischen Zellen haben einen pH-Wert von 7,0 bis 7,5 bei 37 ° C, und wenn die Temperatur auf 0 ° C fällt, kann sie 8,0 erreichen.

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