(1) die Herstellung vonHepes

das synthetischeRoute

• Synthese von Verbindung 1

das Piperazinhexahydrat wurde als Rohmaterial verwendet, gelöst in Ethanol, um eine farbig transparente Lösung zu bilden, dann wurde Ethylenoxid unter Rückfluss bei 80 ° C zugegeben. Sobald die Reaktion beendet war, wurde Ethanol unter vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand wurde abgetrenntDurch Vakuumfraktionierung destilliert und gereinigt wurde Destillat von 125 ~ 127 ° C gesammelt (Verbindung 1).

• Synthese von Verbindung 2

zuerst wurden wasserfreies Natriumsulfit und Wasser zu dem Kolben gegeben, die Mischung wurde in einem Wasserbad erhitzt. als die Temperatur 90 ° C erreichte, 1,2-DichlorethEs wurde tropfenweise zugegeben und der Rückfluß wurde fortgesetzt. die Reaktionsflüssigkeit wurde unter vermindertem Druck in einem Wasserbad von 70ºC zu einem weißen Feststoff konzentriert, der Feststoff wurde in 95% Ethanol suspendiert und das Gemisch wurde auf Rückfluß erhitzt und filtriert, um unlösliche Bestandteile zu entfernen. der Überstand wurde über Nacht bei 0ºC stehen gelassen. weiße schuppige Kristalle wurden durch Saugfiltration unter Verwendung eines Buchner-Trichters gesammelt.

• synthetischs von Hepes (cas 7365-45-9)

die Verbindung 1, 2 und Wasser wurden in einen Kolben gegeben, zu einer farblosen transparenten Lösung (ph & gt; 13) gerührt und bei 110ºC bis 115ºC in einem Ölbad extern inkubiert. rühre es für 20 Minuten und der pH-Wert der Reaktionslösung sank allmählich auf 9 und 5n Natriumhydroxid wurde tropfenweise zugegebenpflegender pH-Wert der Reaktionslösung zwischen 9 und 10. Wenn der pH-Wert der Reaktionslösung nicht abnimmt, wird das Natriumhydroxid gestoppt und der Rückfluß wird fortgesetzt, bis die Reaktion beendet ist.

die abgekühlte Reaktionslösung wurde dann mit Wasser verdünnt und durch eine Ionenaustauscherharz [h +] * - Säule gereinigt. die gesammelte Lösung wurde durch Chromatographie erhaltenunter reduziertem Druck konzentriert und dann filtriert und verdampft. die farblose transparente klare Lösung wurde weiter zu einem dicken Sirup konzentriert, in siedendes 95% Ethanol gegossen, mit Eisessig auf pH 5 eingestellt und sofort absolutes Ethanol zugegeben, um weiße Kristalle auszufällen, natürlich bei Raumtemperatur gekühlt und bei 0 ° platziert c über Nacht.

Die Kristalle wurden durch Saugfiltration unter Verwendung eines Buchner-Trichters gesammelt und mit eiskaltem Ethanol gewaschen. Die gewaschenen Kristalle wurden in 95% Ethanol suspendiert, auf 75ºC erhitzt und Wasser wurde tropfenweise zugegeben, um sie vollständig zu lösen. Nach der Heißfiltration wird der Überstand mit absolutem Ethanol versetzt und natürlich unter Schütteln abgekühlt, um die weißen Kristalle in loser Form auszufällen. Lassen Sie bei 0 ° C überht.

Die Kristalle wurden durch Saugfiltration gesammeltunter Verwendung eines Buchner-Trichters, gewaschen mit eiskaltem wasserfreiem Ethanol und bei 80ºC getrocknet, um das Produkt zu ergeben.

(2) Herstellung von Hepepuffer

abhängig von der Applierung, Hepes + Naoh und Hepes + Salz werden häufig verwendet:

• Hepes + NaOH (500 ml): 119.15 g Hepes werden in 400 ml destilliertem Wasser gelöst, 0,5 ~ 1 m wässrige NaOH-Lösung wird zugegeben, um den pH-Wert einzustellen, und dann werden 500 ml mit destilliertem Wasser hergestellt.
• Hepes + Salz (500ml): hepes 6,5 g, nacl 8,0 g, na2hpo4 • 7h20 0,198 g, den pH-Wert mit 0,5 m wässriger wässriger Lösung einstellen und 500 ml daraus machen.

acGemäß dem Bericht von Lepe-Zuniga et al. hat Hepes eine Phototoxizität, wenn es durch die Erzeugung von Wasserstoffperoxid Umgebungslicht ausgesetzt wird. Es wird daher dringend empfohlen, hepeshaltige Lösungen so weit wie möglich im Dunkeln zu lassen.