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Mops zum Nachweis von Eiweiß in Lebensmitteln und Futtermitteln 2019-08-09 15:05:36


Proteine ​​in Lebensmittel- oder Futtermittelzutaten ändern häufig ihre Struktur und Löslichkeit aufgrund einer Wärmebehandlung oder einer chemischen Reaktion während des Bearbeitungsprozesses, was zu einer schlechten Löslichkeit führt.


Die in den nationalen Standards offenbarten Verfahren zum Nachweis von Proteinen umfassen hauptsächlich drei Arten: das Kjeldahl-Verfahren, die Spektrophotometrie und das Verbrennungsverfahren. Biuret-Methode, BCA-Methode, Coomassie-Blau-Methode, Lowry-Methode und Ultraviolett-Methode werden auch häufig in biochemischen Labors eingesetzt. Die Einzelheiten sind wie folgt:


Tabelle 1. Nachweismethoden für Proteine

Name

Methode

Eigenschaften

Kjeldahl-Methode

(1) zersetzt das Protein; (2) bestimmt die Menge an Ammoniak durch Titration oder Farbentwicklung (3) umgerechnet auf die Gesamtmenge an Protein

es wird am häufigsten verwendet, aber der Test dauert lange (normalerweise 2-4 Stunden)

Spektrophotometrie

Die Gesamterkennungszeit ist relativ kurz, es ist jedoch immer noch ein Aufschlussschritt erforderlich (ca. 1 Stunde oder länger).

Verbrennungsmethode

durch Brennenlassen der Probe bei einer hohen Temperatur zur Erzeugung von Stickstoffgas zur Bestimmung der Gesamtmenge an Protein

Die täglichen Verbrauchskosten sind hoch und der Fluss der Probenerkennung ist gering. Der Nachweis von Proteinproben in großem Maßstab ist nicht anwendbar

biochemisches Labor Biuret-Methode, BCA-Methode, Coomassie-Blau-Methode, Lowry-Methode und UV-Methode

Nachweis von Proteinen in hochreinen Proteinproben durch kolorimetrische oder direkte Kolorimetrie nach chemischer Farbentwicklung

Die Nachweiszeit ist erheblich kürzer, erfordert jedoch eine vollständige Auflösung des Proteins in der Probe sowie eine Klärung des chromogenen Systems und keine Beeinflussung des Strahlengangs.

Daher besteht ein dringender Bedarf an der Entwicklung eines Assays, der die Genauigkeit der Messergebnisse gewährleistet, eine kurze Messzeit und eine breite Palette von anwendbaren Messzielen aufweist (insbesondere kann er direkt zur Messung des Proteingehalts in Proben verwendet werden) schwerlösliche Proteine ​​enthalten).

Die Forscher [1] entwickelten eine neue Methode mit folgenden Schritten:

(1) Reagenz a: Auflösen von linearem Natriumalkylsulfat und Natriumhydroxid in Wasser auf eine Molkonzentration von 45 bis 100 mm bzw. 150 bis 300 mm; Reagenz b: Kupfersulfat oder hydratisiertes Kupfersulfat, Natriumtartrat und wasserlösliches Natriumhydroxid in molaren Konzentrationen von 5 ~ 10 mm, 15 ~ 30 mm und 150 ~ 750 mm;


(2) Probenvorbereitung: Verwendung von proteinfreiem Wasser oder Puffer als Blindprobe; Lösen von Rinderserumalbumin in Wasser oder 3-Morpholinpropansulfonsäure (Mops) puffern und stellen die Konzentration des Proteins ein, wodurch eine Reihe von Lösungen mit einer Proteinkonzentration im Bereich von 0,2 mg / ml bis 30 mg / ml als Standardproteinprobe erhalten werden; Dispergieren des zu testenden proteinhaltigen Materials in Wasser oder Puffer und gegebenenfalls durch Verdünnungsverarbeitung, um eine zu testende Probe herzustellen;


(3) Mischen von Reagenz a mit einer Blindprobe, einer Standardproteinprobe bzw. einer zu testenden Probe, um eine entsprechende Reagenzmischung zu erhalten, wobei der Proteingehalt in der Reagenzmischung der zu testenden Probe entspricht lineare Bereichsanforderung. und jedes Reagens wird eine Mischung in einem Wasserbad auf eine Temperatur von 90 bis 100 ° C erhitzt und dann auf Raumtemperatur abgekühlt;


(4) Mischen jeder Reagensmischung mit Reagens b, um eine entsprechende Reagensmischung b zu erhalten, und Erhitzen jeder Reagensmischung b in einem Wasserbad auf eine Temperatur von 50 bis 70 ° C und Abkühlen auf Raumtemperatur;


(5) Filtrieren jedes der Reagens-b-Gemische unter Verwendung des Reagens-b-Gemisches der abgekühlten Blindprobe als Referenz und Messen des Reagens-b-Gemisches der abgekühlten Standardproteinprobe und des Reagens-b der zu testenden Probe bei 540 nm unter Verwendung eines Spektrophotometers.


(6) Gemäß dem Proteingehalt der Quasi-Protein-Probe wird die Beziehung zwischen dem Proteingehalt und der Extinktion durch lineares Anpassen erhalten und der Proteingehalt in der zu testenden Probe wird berechnet.


Das Verfahren zum Nachweis von Proteinen erfordert eine kürzere Nachweiszeit, erhöht die Löslichkeit von unlöslichen Proteinen, hat ein breites Anwendungsspektrum, genaue Messergebnisse, einen weiten linearen Bereich, eine hohe Empfindlichkeit, hohe Präzision und gute Reproduzierbarkeit. Darüber hinaus ist die Testmethode mit Zubehör und Geräten für Hochdurchsatzmessungen kompatibel und kann große Probenmengen schnell erfassen, sodass sie sich besser für industrielle Prozesse im großen Maßstab eignet.


Referenz

Proteinnachweismethode und Proteinnachweis-Kit. cn105987884b, 03.03.2015.

bearbeitet von suzhou yacoo science co., ltd.

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