Tris (hydroxymethyl) aminomethan(Tris), auch Tromethamin genannt, ist eine schwache Base, die üblicherweise als biologisches Puffersystem bei der Herstellung biologischer Produkte verwendet wird. Dies kann zu Hypoglykämie, Hypotonie, Übelkeit, Erbrechen, übermäßiger Einnahme oder Niereninsuffizienz führen, Alkaliämie verursachen, die Atmung hemmen und sogar die Atmung stoppen. Daher ist es notwendig, den Tris-Gehalt in biologischen Produkten zu testen. wie erkennt man es dann?

Gegenwärtig verwendet der quantitative Nachweis von Tris hauptsächlich das Verfahren der Säure-Base-Titration, jedoch ist seine quantitative Grenze hoch und es ist anfällig für Interferenzen verschiedener Säure-Base-Gruppen. Die biologischen Produkte enthalten eine große Menge an Carboxylgruppen, Aminogruppen sowie Anionen und Kationen, so dass Tris im Produkt nicht quantitativ durch Titration nachgewiesen werden kann.

Um die obigen Probleme zu lösen, erfanden die Forscher [1] ein Verfahren zum NachweisTris Pufferin biologischen Produkten durch Ionenchromatographie und die spezifischen Schritte sind wie folgt:

(1) Wasser für Injektionszwecke wird zu dem biologischen gefriergetrockneten Produkt zum Auflösen und Filtern hinzugefügt, oder die biologische wässrige Lösung wird direkt filtriert und das Filtrat wird als Testlösung genommen; Tris wird zu dem Wasser für die Injektion hinzugefügt, um sich aufzulösen, und die Lösung verschiedener Konzentrationen wird nach der Gradientenverdünnung als Referenzlösung erhalten;

(2) ein pulsampereometrischer Detektor und das Verfahren zum Auffüllen nach der Säule werden verwendet. Die Säule war eine Cs16-Kationenaustauschersäule mit einer mobilen Phase von 40 mmol / l Methansulfonsäurelösung bei einer Fließgeschwindigkeit von 1 ml / min. das Nachfüllen der Säule war eine alkalische Lösung von Natriumhydroxid oder Kaliumhydroxid bei einer Konzentration von 500 mmol / l mit einer Flussrate von 0,3 ml / min;

(3) quantitative Analyse unter Verwendung des externen Standardverfahrens, die hergestellten verschiedenen Konzentrationen der Referenzlösung wurden getestet und die Konzentrations-Peakflächen-Standardkurve von Tris wurde gezeichnet, um die Regressionsgleichung der Standardkurve zu erhalten; Die Probenlösung wurde unter den gleichen Bedingungen getestet und der Tris-Gehalt in der Testprobe wurde durch die vorstehende Regressionsgleichung berechnet.

Die Nachweisgrenze liegt bei 3,14 × 10–5 mmol / l, die minimale Bestimmungsgrenze beträgt 1,05 × 10–4 mmol / l, die Wiederherstellungsrate beträgt 93,8% bis 100,1% und der Reproduzierbarkeitsbereich beträgt 0,10% bis 0,52%. (rsd, n = 5).

Verglichen mit dem herkömmlichen Säure-Base-Titrationsverfahren weist das Verfahren eine niedrigere Nachweisgrenze und eine niedrigere Bestimmungsgrenze auf und wird nicht durch die Säure-Base-Gruppe beeinträchtigt, die das Protein trägt, und das Anion und Kation in der Probe wird nicht beeinträchtigt erfordert keine Derivatisierung und komplexe Probenvorbereitung. es kann den Inhalt von Tris erkennen (cas 77-86-1) in verschiedenen biologischen Produkten, hat eine gute Selektivität und hat keine andere Peakinterferenz im Bereich der Tris-Retentionszeit. Es verfügt über eine hohe Erkennungsempfindlichkeit und eine schnelle Analysegeschwindigkeit und kann für die Inhaltserkennung und Qualitätsbewertung von Tris in biologischen Produkten verwandter Branchen eingesetzt werden.

Referenz

[1] yu xiaoping, yu jin. ein Verfahren zur Bestimmung von Tris in biologischen Produkten durch Ionenchromatographie. 2018, cn107782829a.