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freies DNA-Extraktions- und Anreicherungskit mit Guanidinhydrochlorid 2019-07-05 13:57:25


Nukleinsäuren umfassen Desoxyribonukleinsäure (DNA) und Ribonukleinsäure (RNA) und sind eine Klasse von biologischen Makromolekülen mit genetischer Information. Die Studie ergab, dass freie DNA auch sehr wichtige genetische Informationen enthält. In den letzten Jahren hat sich die freie DNA-Forschung daher zu einem wichtigen Forschungsfeld in der molekulardiagnostischen Genomforschung entwickelt und wurde schrittweise auf alle Stadien von der Erstdiagnose des Tumors bis zur Behandlung und Entwicklung angewendet. Die Extraktionstechnik der freien DNA muss jedoch noch weiter verbessert werden.


Die Forscher entwickelten ein Kit zur Extraktion und Anreicherung von freiem DNA und eine Methode zur Extraktion von freiem DNA mit dem Ziel, das technische Problem zu lösen, dass das organische Lösungsmittel bei der bestehenden Methode zur Extraktion freier Nukleinsäuren eine gewisse Toxizität aufweist.


Kostenloses DNA-Extraktions- und Anreicherungskit

Das Kit enthält Probenlysat, Bindungslösung, Primärwäsche, Sekundärwäsche, Elutionsmittel und nanomagnetische Kügelchen:


  • Zu den Probenlysatkomponenten gehören nukleasefreies Wasser, Reagenz a und Reagenz b. Reagenz a ist mindestens eines von Guanidiniumisothiocyanat, Guanidinhydrochlorid , Natriumiodid und Natriumperchlorat. Reagenz b ist mindestens eines von Tween20, Triton-x100, SDS, np40 und einem nichtionischen Tensid vom Polyoxyethylentyp;
  • Zusätzlich zu den Bestandteilen des Probenlysats enthält die Bindungslösung auch das Reagens c, das mindestens eines von Isopropanol und absolutem Ethanol ist;
  • Die Zusammensetzung der Primärwaschlösung ist die gleiche wie die der kombinierten Lösung.
  • die zweite Waschflüssigkeit besteht aus nukleasefreiem Wasser, einer molaren Konzentration von 0,1 bis 1 ml Natriumchloridlösung, Tris-Puffer oder Te-Puffer;
  • das Elutionsmittel ist eines von nukleasefreiem Wasser, Tris-Puffer oder Te-Puffer;
  • der magnetische kern von nanomagnetischen kügelchen ist fe-co-niox. Die Partikelgrößenverteilung liegt zwischen 300 und 400 nm. Die Oberflächenschicht des Magnetkerns ist von innen nach außen mit mindestens einer Kohlenstoffschicht und einer anorganischen Siliciumdioxidschicht beschichtet. und Polyethylenglykol wird kovalent auf die äußerste Schicht gepfropft.



freie DNA-Extraktionsmethode


  • zuerst die Protease k, dann die Probe und die Lysatsequenz zugeben, die Komponenten in das Zentrifugenröhrchen geben, schütteln und inkubieren, um die Probenlyse durchzuführen;
  • die nanomagnetischen Kügelchen und die Bindungslösung werden proportioniert, um eine nanomagnetische Kügelchenbindungslösung zu bilden;
  • Die vorbereitete Nano-Magnetic-Bead-Bindungslösung wird zu der Probe gegeben, geschüttelt und gemischt und der Überstand verworfen.
  • Waschen Sie die freie DNA mit einer Waschlösung.
  • Waschen Sie die freie DNA mit einer sekundären Waschlösung.
  • Fügen Sie das Elutionsmittel hinzu und schütteln Sie es, um die Nanokügelchen zu resuspendieren, und schütteln Sie es weiter, um die freie DNA auf den Nanokügelchen zu eluieren.


Bei der Methode werden keine toxischen Reagenzien wie Benzol und Chloroform in der herkömmlichen Methode verwendet, um die Schäden für die Versuchspersonen zu minimieren, das moderne Umweltschutzkonzept vollständig einzuhalten und die klinischen Verwendungsbedingungen besser zu erfüllen. Lyse, Denaturierung und Förderung der Nukleinsäureanreicherung, die meisten Proben erfordern keine zusätzliche Verwendung von Proteinase k und Probenlysat; Es benötigt weniger Zeit und ist für alle Binde-, Wasch- und Elutionsprozesse bei Raumtemperatur einfach zu handhaben.


Referenz

Kostenloses DNA-Extraktions- und Anreicherungskit und kostenlose DNA-Extraktionsmethode. cn109913447a, 2019-06-21.


bearbeitet von suzhou yacoo science co., ltd.

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