Die stabile Übertragung von genetischem Material ist die Grundlage der Lebensreproduktion. Die exakte Replikation und Verteilung von DNA ist die Grundlage des Transfers von genetischem Material und auch die beiden biologischen Kernereignisse des Zellzyklus. DNA-verwandte Enzyme sind einer der wichtigsten Faktoren im Replikationsprozess. sie sind nicht nur am prozess der normalen genomischen dna-synthese beteiligt, sondern auch an verschiedenen reparaturprozessen unter dna-schäden. Eine Vielzahl von DNA-verwandten Enzymgenmutationen ist mit bestimmten Tumoren und genetischen Erkrankungen verbunden. DNA-verwandte enzymelektrochemische Biosensoren erleichtern den Nachweis. 3- (n-Morpholino) propansulfonsäure (Mops) ist ein häufig verwendeter biologischer Puffer.

Vor kurzem haben Forscher [1] einen DNA-bezogenen elektrochemischen Enzym-Biosensor auf Basis von DNA-Kupfer-Nanoclustern mit guter Spezifität, hoher Empfindlichkeit, schneller Detektionsgeschwindigkeit, genauen und zuverlässigen Ergebnissen und geringen Kosten bereitgestellt. Die spezifischen Schritte lauten wie folgt:

(1) Elektrode 1: Sulfhydryl-DNA (2,5 ~ 7,5 & mgr; l, 0,25 ~ 0,75 & mgr; m) und Tris (2-carboxyethyl) phosphin (tcep) (0,5 ~ 1,5 & mgr; l, 0,5 ~ 1,5 mm) werden gleichmäßig bei 27 ~ 42 ° C gemischt Für 30 bis 90 Minuten auf die Oberfläche einer sauberen blanken Goldelektrode (au) fallen lassen und die Elektrode mit verdünntem Wasser waschen.
(2) Elektrode 2: 1 ~ 3 μl Mops-Puffer (10 mm Mops, 150 mm NaCl, pH 7,6), 0,5 bis 1,5 μl 5 × tdt-Puffer und dttp (0,5 ~ 1,5 μl) werden mit tdt-Reaktionslösung hergestellt 5 ~ 15 mm) und tdt (0,1 ~ 1,5 μl, 5 ~ 15 μl / ml), das Gesamtvolumen auf 2,5 ~ 7,5 μl einstellen, gut mischen, auf die Oberfläche von Elektrode 1 tropfen und bei 27 ~ 42 ° C 0,5 ~ 1,5 platzieren h, waschen Sie die Elektrode mit verdünntem Wasser.

(3) Elektrode 3: Cu² & spplus; (2,5 bis 7,5 ul, 0,5 bis 1,5 mm) wurde tropfenweise auf die Elektrodenoberfläche von Elektrode 2 gegeben und 10 bis 30 Minuten bei Raumtemperatur inkubiert, und die Elektrode wurde langsam mit destilliertem Wasser gepuffert. dann wurde Natriumascorbatlösung (2,5 bis 7,5 & mgr; l, 1 bis 3 mm) tropfenweise auf die Oberfläche der Elektrode gegeben und 10 bis 30 Minuten bei Raumtemperatur umgesetzt und die Elektrode langsam mit destilliertem Wasser gewaschen.

Gegenüber dem bisherigen Verfahren weist der Sensor folgende Vorteile auf:
(1) hohe Empfindlichkeit. Die aktuelle Reaktion des Sensors auf die tdt-Nachweisgrenze beträgt 0,0008 u / ml. Die Nachweisgrenze für die exo i -Konzentration beträgt 0,002 u / ml. Dies zeigt an, dass der Sensor eine hochempfindliche Erkennung von tdt und exo i erreicht.
(2) hohe Spezifität. andere gebräuchliche Enzyme wie Urease (Urease), Acetylcholinesterase (Schmerz), Uracil-DNA-Glycosylase (UDG), Histonacetylase (Hut), Proteinkinase (PKA), alkalische Phosphatase (ALP) haben keine Beeinträchtigung des TDT und EXO i Aktivitätserkennungssysteme.
(3) Inhibitornachweis. Durch die elektrochemische Reaktion des elektrochemischen Biosensors auf die Enzymaktivität kann der Nachweis des tdt-Inhibitors Natriumpyrophosphat (pp) und des exo i-Inhibitors Polyethylenglycol (peg) sowie die Korrelation der elektrochemischen Reaktion des Sensors mit Enzyminhibitoren erreicht werden kann erhalten werden ..
(4) die Reagenzien sind in einer kleinen Menge vorhanden, die Nachweisgeschwindigkeit ist hoch und die Kosten sind niedrig.

Zusammenfassend lässt sich sagen, dass der DNA-bezogene enzymelektrochemische Biosensor die Vorteile einer hohen Empfindlichkeit, einer guten Selektivität, einer einfachen Bedienung, einer schnellen Analyse und einer einfachen Bedienung aufweist und den Nachweis niedriger Konzentrationen von tdt und exo i ermöglichen kann und gute Anwendungsmöglichkeiten bietet.

Referenz

[1] DNA-verwandter enzymelektrochemischer Biosensor auf der Basis eines DNA-Kupfer-Nanoclusters und dessen Anwendung. cn109613096a, 21.01.2019.

bearbeitet von suzhou yacoo science co., ltd .

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