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Kappen, molekulare Marker oder biochemischer Puffer? 2019-01-18 11:07:29

In biochemischen Experimenten wird häufig die Abkürzung „Kappen“ verwendet. Sie hat zwei völlig unterschiedliche Bedeutungen.


1. durch molekulare Marker gespaltene amplifizierte polymorphe Sequenzen

KappenbufferGespaltene amplifizierte polymorphe Sequenzen, auch bekannt als rflp-pcr, die hauptsächlich für die Restriktionsanalyse von pcr-amplifizierten DNA-Fragmenten verwendet werden. Es ist eine Technik zum Design spezifischer Primer auf der Grundlage von est- oder veröffentlichten Gensequenzen und zur Kombination von spezifischem pcr mit Restriktionsenzymverdau, um einen Polymorphismus nachzuweisen.


Mit der Entwicklung der molekularbiologischen Technologie hat sich auch die molekulare Marker-Technologie von dna schnell entwickelt. Es gibt Dutzende von molekularen Markern wie rflp, aflp, sts, kappen, narbe, ssr, snp, rapd, issr, trap, etc., sie sind weit verbreitet in der genetischen Zucht, Genom-Mapping, Gen-Mapping, phylogenetischer Identifizierung von Arten Genbankkonstruktion, Genklonierung und so weiter. Verschiedene molekulare Marker haben unterschiedliche Vor- und Nachteile, und ihre Hauptanwendungen sind auch unterschiedlich. caps hat die Vorteile der Co-Dominanz, der Ortsspezifität, der einfachen Bedienung und der niedrigen Kosten und wurde weit verbreitet bei der Genotypisierung von Pflanzen, der Lokalisierung, dem Klonen, der molekularen Identifizierung und der genetischen Vielfalt von Tieren, der Identifizierung von Sorten, der Verknüpfungskarten und der Identifizierung von Mikroorganismen verwendet. Es hat die folgenden Eigenschaften:
(1) es gibt viele Kombinationen von Primern und Restriktionsenzymen, was die Wahrscheinlichkeit erhöht, Polymorphismen aufzudecken, und ist einfach zu bedienen und kann durch Agarosegelelektrophorese analysiert werden;
(2) Bei Eukaryonten ist der Caps-Marker codominant, der zwischen homozygoten Genotypen und heterozygoten Genotypen unterscheiden kann;
(3) die erforderliche Menge an DNA ist gering und die Konzentration an DNA ist nicht kritisch;
(4) die verwendeten Primer sind länger, die Amplifikationsergebnisse sind stabiler und der Schritt des Membrantransfers bei der rflp-Analyse wird vermieden, und die Genauigkeit der rflp-Analyse kann aufrechterhalten werden;
(5) der Vorgang ist einfach, schnell und hoch automatisiert.

Obwohl der Caps-Marker viele Vorteile aufweist, ist das Durchmustern einer geeigneten Enzymkombination arbeitsintensiv, da er ein Restriktionsenzym verwenden muss, und es wurde festgestellt, dass die Anzahl der mutierten Spaltstellen begrenzt ist, was seine Entwicklung im großen Maßstab begrenzt Anwendung.


2. biochemischer Puffer—n-Cyclohexyl-3-aminopropansulfonsäure
Die Summenformel der Kapseln ist c9h19no3s, der pka-Wert beträgt 10,4 bei 25 ° C und der Pufferbereich 9,7 bis 11,1. obwohl caps nicht von good et al. eingeführt wird, wird es manchmal auch als guter Puffer bezeichnet. Seine Anwendungsbereiche sind wie folgt:
(1) als Transferpuffer für Diffusions- und Elektroblotting verwendet wird;
(2) Bindungspuffer und Eluent bei der Kationenaustauschchromatographie;
(3) laufender Puffer bei der Kapillarelektrophorese;
(4) wirksame Kristallisationslösung für verschiedene Proteine;
(5) Enzymtestpuffer
(6) die Aktivität der alkalischen Phosphatase unterstützen und das Wachstum von Aeromonas spp. bei ph 10,5;
(7) geeignet zur Verwendung mit dem Bicinchoninsäuretest (bca).
das Rezept von Caps Buffer, 50x:

111 g Kappen auflösen (3- [Cyclohexylamino] -1-propansulfonsäure) in h2o und stellen Sie den pH-Wert mit Naoh auf 10,5 ein. Erhöhen Sie das Endvolumen mit h2o auf 1 Liter. Die Endkonzentration beträgt 500 mm.


bearbeitet vonSuzhou Yacoo Wissenschaft co., Ltd.
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