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Bicine-Laufpuffer, der eine verbesserte Auflösung und Repräsentation von Membranproteinen bereitstellt 2018-03-26 13:57:56

SDS-Seite Methodewird verwendet, um Protein vor der Analyse durch MS zu trennen. und laufende Puffer, wie zwie Glycin-oder Tricin-basierte, wird eine Auswirkung auf die Proteintrennung habenverarbeiten. Tricine-basierte Laufpuffer-Systeme wurden erfolgreich eingesetztdie Trennung von verschiedenen Arten von Proteinen.


obwohl Tricine-dsds-Seiteist ein leistungsfähiges Werkzeug bei der Membranproteintrennung, Williams et al. (doi: 10.1002 / elps.200500730)erforschte auch andere Puffersysteme in Verbindung mit dem dsds-page-Ansatzund beschreiben eine Orthogonale Bicine -dsds-Seite Methode für die Analyse der MembranProteine ​​aus dem anaeroben Bakterium, ClostridiumThermocellum . und sie verglichen Glycin-, Tricin- und Bicin-dsds-page-Systeme.


zuerst, Thermocellum Zellkulturen wurden bei55 ° cund geerntet. und Glycin-, Tricin- und Bicin-dsds-Seite wurden verwendetTrennen Sie dann die Proteine ​​in der ersten Dimension mit dem Laemmli-Protokollweitere Trennung in der zweiten Dimension. wegen sds-page gels und läuftPuffer werden normalerweise im Bereich von 6.6-8.8 ph betrieben, was bicine- (phBereich von 7,6-9,0) und auf Tricinen basierende (pH-Bereich von 7,4-8,8) Puffersystemeetwas besser geeignet. und gemäß den experimentellen Ergebnissen des erstenDimension, die optimierten Parameter für die Geltrennung in der Bicine- und Tricine-DSD-Seitewurden erhalten. basierend auf den optimierten Parametern erhalten, großformatige Experimentewurden durchgeführt, um die Proteindarstellung weiter zu verbessern und das Protein zu erhöhenLadekapazität des Gels.


in der Arbeit von Williamset al. fanden sie andere elektrophoretische Puffersysteme als dieDer traditionelle Laemmli-Ansatz erhöht die Auflösung und Repräsentation der MembranProteine. und es wurde festgestellt, dass die bicine-dsds-Seite die beste Trennung lieferteZustand von allen.


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