Während des Ausbruchs von COVID-19 ist eine schnelle Nukleinsäurediagnose äußerst wichtig für die Prävention und Bekämpfung der Epidemie. Die Extraktion von Nukleinsäureproben ist in zwei Teile unterteilt: Protein- und Nukleinsäuredissoziation und Nukleinsäureextraktion. Die derzeitige Nukleinsäureextraktion und -reinigung verwendet meistens Harzadsorption oder Magnetperlenadsorption, was eine Hochgeschwindigkeitszentrifuge oder ein automatisches Nukleinsäureextraktionsinstrument erfordert, was viel Zeit in Anspruch nimmt. Um die bestehenden Probleme zu lösen, haben Li Xiaofeng und andere eine Nukleinsäuredissoziationslösung entwickelt. Die Dissoziationslösung besteht aus Guanidinisothiocyanat , wassergesättigtes Phenol, alkoholisches Reduktionsmittel und 8-Hydroxychinolin. Die Komponenten und ihre Konzentrationen und pH-Werte sind wie folgt ^[1] :

Guanidinisothiocyanat : die molare Konzentration beträgt 1 mol/L-2 mol/L;

Wassergesättigtes Phenol: Die Massenprozentkonzentration beträgt 25% -50%;

Alkohol-Reduktionsmittel: Das Alkohol-Reduktionsmittel ist 2-Mercaptoethanol oder Dithiothreitol, und die Massenprozentkonzentration beträgt 0,175 %–0,35 %;

8-Hydroxychinolin: die Massenprozentkonzentration beträgt 0,05 %–0,1 %;

Der pH-Wert der Dissoziationslösung beträgt 7,0–8,5.

Die kombinierte Anwendung der Dissoziationslösung und der Gelsäule hat folgende positive Wirkungen:

(1) Zellen werden schnell lysiert, die Nukleinsäureextraktion kann in 1 Minute abgeschlossen werden, und die durch die Dissoziation extrahierte Nukleinsäure kann direkt in der PCR-Reaktion verwendet werden, was die gesamte Betriebszeit der PCR-Nukleinsäurediagnose stark verkürzt;

(2) Die Integrität der Nukleinsäure kann über einen langen Zeitraum aufrechterhalten werden: Von der Probenentnahme über den Transport bis zur Laborextraktion der Nukleinsäure kann die Integrität der Nukleinsäure in nur drei Minuten und bis zu einer Woche aufrechterhalten werden;

(3) Es muss keine teure Ausrüstung vorhanden sein, nur eine Handzentrifuge.

Verweise

[1] CN 112159806 B Anwendung einer Nukleinsäuredissoziationslösung bei der Nukleinsäureextraktion und -reinigung.